解读ATCC细胞库介绍及其使用方法

啃蝌知道

　　ATCC(美国模式菌种收集中心)，又称为美国菌种保藏中心， 是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的，非赢利性组织，可提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC的创立源于1925年某科学会意识到，科学研究对于微生物的需求增大，从而萌发了一个想法：创建一个微生物相关制品供应中心。至今，ATCC向世界各地的、企业、科研机构提供生物制品、技术支持和培训，成为了一个以非盈利为目的的全球性质的生物资源中心。ATCC拥有目前世界上zui大的、品种zui丰富的微生物、细胞系以及重组DNA原料，同时它也是科研工作者gogn ren的提供shijieji的可靠的研究材料的供应商。随著行业的影响力不断扩大，ATCC官网的生意也在不断的蔓延，市场的发展也在逐步推进。http://www.biofeng.com/ATCC/

　　
　　ATCC细胞的使用方法：
　　
　　1、细胞收到后的操作方法：
　　
　　取25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜，以稳定细胞状态。然后，用75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，收集瓶内液体于50ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用6ml细胞培养基重悬，全部接种到25cm2培养瓶中，再放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多，可以直接1:2分瓶培养。
　　
　　2、细胞传代：
　　
　　细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离5min，弃上清，用12ml细胞培养基重悬细胞，按1:2的比例进行接种传代，接种到25cm2培养瓶中，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，2-3天更换培养液。　　
　　
　　3、细胞冻存：
　　
　　a、细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=5:4:1）重悬细胞，并放置于冻存管中。
　　
　　b、先将细胞冻存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃隔夜，24h后可转入液氮中进行长期保存。
　　
　　4、细胞复苏：
　　
　　a、从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
　　
　　b、将冻存管中的细胞移至含有5ml细胞培养液的15ml离心管中，然后1000rpm/min，离心5min。
　　
　　c、弃上清，沉淀细胞用6ml细胞培养基重悬，接种到培养瓶中，比较后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
　　
　　d、第二天，换用新鲜细胞培养基继续培养。